@MASTERSTHESIS{ 2010:997129943,
 	title = {Estudo cinético da proteína dissulfeto  isomerase: nitróxidos como reguladores da atividade catalítica},
 	year = {2010},
 	url = "https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/723",
 	abstract = "A Proteína Dissulfeto Isomerase (PDI, E.C. 5.3.4.1), pertencente à superfamília das
 tiorredoxinas, é uma tiol oxidorredutase que catalisa a oxidação e redução de tióis e a
 isomerização de dissulfetos intramoleculares. Essa chaperona tem atividade dependente de
 cisteínas presentes nos sítios ativos, e está presente no retículo endoplasmático (RE) e/ou na
 membrana plasmática de células eucarióticas. Estudos anteriores da atividade catalítica de
 PDI foram realizados utilizando-se como pseudo-substratos, entre eles, a di-eosinaglutationa
 oxidada (Di-E-GSSG), que se mostrou ótima ferramenta para o monitoramento
 da atividade de dissulfeto redutase da PDI. Nesse trabalho, a síntese e purificação
 cromatográfica de Di-E-GSSG foram realizadas e a pureza da sonda foi verificada através
 de cromatografia líquida de alta performance (CLAE). A cinética enzimática da atividade
 redutase de PDI isolada recombinante sobre Di-E-GSSG foi estudada, caracterizando-se os
 principais parâmetros físico-químicos da enzima através da formação do monômero
 fluorescente (λexc=521nm; λemi=542 nm) eosina-glutationa reduzida (E-GSH). O valor da
 constante de Michaelis-Menten (Km) encontrado foi de 520,5±129,8 nM, a velocidade
 máxima de catálise (Vmáx) foi determinada como 1,637±0,1526 nM.min-¹ e a constante
 catalítica (Kcat) encontrada foi 1,364 . 10-³.s-³. São relatados na literatura poucos compostos
 químicos capazes de inibir a atividade catalítica da PDI. Assim, para verificar se compostos
 radicalares estáveis desempenham essa atividade, foram testados nitróxidos piperidínicos
 como possíveis inibidores de PDI. Esses compostos, que possuem propriedades
 antioxidantes, antiinflamatórias e radioprotetoras, apresentam efeito “scavenger” sobre
 diferentes espécies radicalares, dentre as quais, radicais tiila. O nitróxido 4-hidroxi-2,2,6,6-
 tetrametilpiperidina-1-oxil (Tempol) mostrou-se um inibidor pouco potente da atividade
 redutase da enzima. Entretanto, três outros nitróxidos, sintetizados especificamente para
 este trabalho, demonstraram maior poder de inibição, com uma correlação direta com o
 aumento de hidrofobicidade das estruturas químicas dos mesmos. Essa capacidade de
 inibição foi confirmada sobre a atividade de PDI presente em plaquetas humanas,
 corroborando a hipótese de que os nitróxidos são candidatos a novos fármacos moduladores
 de funções celulares onde esteja envolvida a atividade de PDI.",
 	publisher = {Universidade Federal de Alfenas},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Química},
 	note = {Instituto de Química}
}